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色譜柱的清洗和再生

發布于 2016/11/08閱讀(5445)來源 ltrlw

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除非特殊說明,在所有情況下,所用溶劑的體積應該是色譜柱體積的 40-60 倍。

應在清洗過程開始和結束時各測一次柱效和容量因子等,比較色譜柱性能的改善,以確定清

洗的效果。

確保色譜柱中沒有樣品和緩沖溶液,清洗前所用的溶劑應與最初清洗時所用的溶劑相溶。

應確保實驗測試時所用的流動相與色譜柱中最后的溶劑相溶。

1 正相填料

用四氫呋喃沖洗。

用甲醇沖洗。

用四氫呋喃沖洗。

二氯甲烷沖洗。

用無苯正己烷沖洗。

2 反相填料

用 HPLC 級水沖洗,沖洗時進 4 等份的 200μl 的二甲亞砜(DMSO)。

用甲醇沖洗。

用氯仿沖洗。

用甲醇沖洗。

3 陰離子交換填料

用 HPLC 級水沖洗。

用甲醇沖洗。

用氯仿沖洗。
 
4 陽離子交換填料


用 HPLC 級水沖洗;在沖洗的過程中進 4 等份 200μl 的 DMSO

四氫呋喃沖洗。


5 蛋白質凝膠過濾填料


去除蛋白質尺寸排阻介質中的污染物有兩種清洗/再生的方法。

弱保留蛋白質

用 30moL/L pH3.0 磷酸鹽緩沖液沖洗。

強保留蛋白質

用 100%的水到 100%的乙腈梯度洗脫 60min。

6 多孔石墨化碳

多孔石墨碳有四種再生的方法,選用哪一種方法依賴于被分析物和所用的溶劑。

酸堿再生

適合于使用極性流動相分析離子類分析物。

將色譜柱倒裝

用 50ml 含 0.1%三氟乙酸的四氫呋喃/水(1:1)溶液 1ml/min 流速沖冼。

用 50ml 含 0.1%三乙胺或氫氧化鈉的四氫呋喃/水(1:1)溶液 1ml/min 流速沖冼。

用 50ml 含 0.1%三氟乙酸的四氫呋喃/水(1:1)溶液 1ml/min 流速沖冼。

用 95%甲醇水溶液沖洗重新平衡。

將色譜柱改為正向。

作者:英國的 R.Plumb-Glaxo

強有機溶劑再生

適合于水相分析極性或離子類分析物。

用 50ml 丙酮以 1ml/min 流速沖洗。

用 120ml 二丁醚以 1ml/min 流速沖洗。

用 50ml 丙酮以 1ml/min 流速沖洗。

用水沖冼至平衡。

正相再生

適合于主要使用正相流動相的多孔石墨化碳柱。

用 50ml 二氯甲烷以 1ml/min 流速沖洗。

用 50ml 甲醇以 1ml/min 流速沖洗。

用 50ml 水以 1ml/min 流速沖洗。

用 50ml 0.1mol/L 鹽酸以 1ml/min 流速沖洗。

用 50ml 水以流速 1ml/min 沖洗。

用 50ml 甲醇以 1ml/min 流速沖洗。

用 50ml 二氯甲烷以 1ml/min 流速沖洗。

用流動相沖冼至平衡。

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